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本試劑盒采用多重?zé)晒釶CR技術(shù)，針對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、輪狀病毒A型（RV-A）3種最常見腸道病毒特有基因的序列，設(shè)計(jì)不同熒光信號(hào)標(biāo)記的探針，通過熒光信號(hào)的變化檢測(cè)豬腸道樣本中是否含有這三種病毒。

儲(chǔ)存條件及有效期：試劑盒置于-20℃冰箱中凍存，試劑盒有效期為一年。

產(chǎn)品特點(diǎn) Features

操作流程 process

豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、輪狀病毒A型三重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)試劑盒操作流程：

1）從試劑盒中取出DEPC水、RT-PCR反應(yīng)液、P溶液、陰性和陽(yáng)性核酸對(duì)照，室溫融化，酶混合液置冰箱4℃待用。

2）取待檢樣本（100μL）用Trizol法或柱法或磁珠法提取RNA，并溶解于50 μL DEPC水中。

3）配反應(yīng)體系：試劑使用前，振蕩混勻，3000rpm離心2秒。

在0.2mL平蓋PCR薄壁管或平蓋PCR八聯(lián)管中，按上述體積加入反應(yīng)體系液（陽(yáng)性和陰性對(duì)照管同樣配制，待檢RNA溶液換為試劑盒提供的陽(yáng)性核酸對(duì)照和陰性核酸對(duì)照，加樣量分別為3μL），蓋好管蓋，去除管中氣泡，并用離心機(jī)甩離，確保所有液體都在管底。將PCR 管放入熒光PCR檢測(cè)儀中。

4）熒光PCR檢測(cè)儀循環(huán)條件設(shè)定。

產(chǎn)品細(xì)節(jié) Details

技術(shù)參數(shù) parameter

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：

陰性對(duì)照的CT值應(yīng)等于None；同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照的CT值應(yīng)小于等于30。

否則，此次試驗(yàn)視為無效。（CT值應(yīng)以S型曲線拐點(diǎn)的循環(huán)數(shù)為準(zhǔn)）

結(jié)果判定：

1）CT值為None的樣本判定為陰性；CT值小于等于38的樣本判定為陽(yáng)性。

2）CT值大于38的樣本建議重做。重做后CT值為None判定為陰性，否則判定為陽(yáng)性。

3）對(duì)于某些未呈現(xiàn)S型曲線，但本底較高的樣本，應(yīng)判定為陰性。

實(shí)驗(yàn)案例展示