技術(shù)知識
冷凍研磨機(jī)的研磨步驟-為什么要進(jìn)行研磨?介質(zhì)
冷凍研磨機(jī),能產(chǎn)生上下震蕩、曲線形旋渦震蕩。冷凍研磨機(jī)借助研磨珠(氧化鋯、鋼珠、玻璃珠、陶瓷珠)的往復(fù)振動、撞擊、剪切, 能對樣品進(jìn)行快速、均勻的研磨。冷凍研磨機(jī)一次可同時(shí)處理36個(gè)樣品。對于難處理的土壤、頭發(fā)、骨骼、牙齒、頑固的細(xì)菌、真菌細(xì)胞壁,甚至孢子體的研磨效率非常高,且整個(gè)研磨過程用時(shí)短,并保留生物分子(DNA、RNA、蛋白質(zhì))和藥物分子的完整性。樣品之間不存在交叉污染。
液氮冷凍研磨必要性
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,動物的肌肉組織、結(jié)締組織、骨組織、毛發(fā)組織等,植物的根、莖、葉、種子等均需磨碎,進(jìn)而對其成分、基因與蛋白質(zhì)及結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究。
為了使各種組織成分在研磨過程中不易被破壞或降解,又為了使組織變硬、脆性增加,從而易于磨碎,特別是有關(guān)核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)的研磨分離提取。需要先將生物材料放置到液氮中快速冷凍,終止細(xì)胞內(nèi)外一切生物反應(yīng),同時(shí)生物材料細(xì)胞完全凍硬、脆化,這樣研磨可以達(dá)到很好的破胞效果,將細(xì)胞磨成粉,使里邊的物質(zhì)釋放出來。
可研磨樣本
◇植物組織:根、莖、葉、花、果、種子等
◇動物組織:大腦、心臟、肺、胃、肝臟、胸腺、腎臟、腸、淋巴結(jié)、 肌肉、骨骼等
◇木材、種子、致密的土壤和沙土等
◇真菌細(xì)菌:酵母、大腸桿菌、孢子等
◇古老干燥的樣本、鐵銹等
◇整個(gè)昆蟲、藻類、珊瑚乳液等
液氮冷凍研磨步驟
1. 將組織樣本分裝到合適的離心管內(nèi)。
2. 在離心管內(nèi)添加適量裂解介質(zhì)
3. 將離心擰緊蓋子,本插入冷凍適配器中。
4. 使用專用適配器夾具,將冷凍適配器整體放置到液氮中,3-15分鐘。
5. 再使用專用適配器夾具,將冷凍適配器整體放置取出,放置到Gd200plus研磨儀,并擰緊固定手柄。
6. 設(shè)置研磨速度和時(shí)間,啟動Gd200plus研磨儀
7. 研磨儀停止后,取出冷凍適配器,并取出離心管。
注意事項(xiàng)
1. 液態(tài)氮在常壓時(shí)的溫度相當(dāng)?shù)牡停褂靡簯B(tài)氮時(shí)須額外注意,避免與皮膚的直接接觸。
2. 將冷凍適配器放置到液氮中和從液氮中取出,需使用專用適配器夾具進(jìn)行,并佩戴防凍手套
1號裂解介質(zhì)
性能:主要是石榴石和氧化鋯珠子,介質(zhì)的鋒利性、菱角和不規(guī)則的表面能夠產(chǎn)生非常高的裂解效果,可以用來裂解、研磨和勻漿堅(jiān)硬難磨的樣品。
適用樣品類型:動物、細(xì)菌、酵母、真菌、植物
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:帶狀氧化鋯珠;不規(guī)則形狀的石榴石
平均大小:鋯珠,6.35mm左右;石榴石0.6mm左右
樣品管規(guī)格:2ml、5ml、15ml、50ml
2號裂解介質(zhì)
性能:主要是0.1mm硅珠,可用來裂解革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,也可以用來處理真菌和孢子。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:0.1mm球形硅珠
平均大小:0.1mm左右
樣品管規(guī)格:2ml、5ml、15ml、50ml
3號裂解介質(zhì)
性能:主要是1mm左右硅珠,可用來裂解酵母、真菌、孢子,也可用于霉菌和藻類
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀: 1mm左右球形硅珠
樣品管規(guī)格:2ml、5ml、15ml、50ml
4號裂解介質(zhì)
性能:主要是1.2-1.6mm陶瓷珠。可以用來裂解比較軟的組織,如腦、肝臟、腎臟、肺、脾等組織。也可以用來裂解植物組織,如葉、根、果實(shí)、培養(yǎng)的細(xì)胞和昆蟲。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀: 1.2-1.6mm球形陶瓷珠
樣品管規(guī)格:2ml、5ml、15ml、50ml
5號裂解介質(zhì)
性能:主要是1.4mm陶瓷珠, 0.1mm硅珠和一個(gè)4mm的玻璃珠。可用于環(huán)境樣品,如土壤、泥漿、廢水和糞便。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:1.4mm球狀陶瓷珠、0.1mm球狀硅珠、4mm球狀玻璃珠
樣品管規(guī)格:2ml、5ml、15ml、50ml
6號裂解介質(zhì)
性能:主要是1.6mm氧化鋁顆粒和1.6mm碳化硅顆粒,可用于裂解粗糙的、堅(jiān)硬的、脆的細(xì)胞膜。
適用樣品類型:動植物組織、細(xì)菌、霉菌、真菌、珊瑚乳液
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:氧化鋁,阿爾法氧化鋁晶體;碳化硅,半面晶體
樣品管規(guī)格:2ml
7號裂解介質(zhì)
性能:主要是1.6mm碳化硅顆粒和2mm玻璃珠。可用于裂解粗糙的、堅(jiān)硬的、脆的細(xì)胞膜,適用于高碰撞力低剪切力的樣品。
適用樣品類型:脆性細(xì)胞壁的植物和動物組織、酵母、真菌
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:碳化硅,半面晶體;玻璃珠,球狀
樣品管規(guī)格:2ml
8號裂解介質(zhì)
性能:主要是2mm玻璃珠和2mm黃色氧化鋯珠組成。可以有效裂解非常堅(jiān)硬的組織,適合于分離完整的細(xì)胞器和超分子結(jié)構(gòu)。
適用樣品類型:動植物組織、木材、種子、致密的土壤和沙土、菌落、整個(gè)昆蟲、古老和干燥的樣本。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:球狀
樣品管規(guī)格:2ml
9號裂解介質(zhì)
性能:主要是2mm黃色氧化鋯珠和4mm黑色陶瓷珠。可以有效裂解非常堅(jiān)硬的組織,適合分離完整的細(xì)胞器和超分子結(jié)構(gòu)。
適用樣品類型:動植物組織、木材、種子、致密的土壤和沙土、菌落、整個(gè)昆蟲、古老干燥的樣本、干磨真菌孢子、鐵銹。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:球狀
樣品管規(guī)格:2ml
10號裂解介質(zhì)
性能:主要是2mm黃色氧化鋯珠和1.6mm氧化鋁晶體。可有效裂解堅(jiān)硬的樣本。
適用樣品類型:動植物組織、菌落(革蘭氏陽性或陰性菌)、真菌、珊瑚乳液、干磨真菌孢子、鐵銹。
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:黃色氧化鋯珠,球狀;氧化鋁,阿爾法氧化鋁晶體。
樣品管規(guī)格:2ml
11號裂解介質(zhì)
性能:主要是6mm氧化鋁珠和氧化鋯陶瓷珠。用來打碎堅(jiān)硬、脆的組織。
適用樣品類型:所有樣本、艱難的樣本、骨頭、種子、孢子
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:不規(guī)則形狀
樣品管規(guī)格:2ml、15ml、50ml
12號裂解介質(zhì)
性能:主要是3mm不銹鋼珠子,用來打碎堅(jiān)硬、脆的組織。
適用樣品類型:所有樣本、艱難組織、骨骼肌、骨頭、肺、心臟、種子、孢子
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:不銹鋼,球狀
樣品管規(guī)格:2ml、15ml、50ml
13號裂解介質(zhì)
性能:主要是6mm不銹鋼珠子,用來打碎堅(jiān)硬、脆的組織。用于從艱難的樣本中提取RNA。
適用樣品類型:所有樣本、艱難組織、骨骼肌、骨頭、肺、心臟、種子、孢子
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:不銹鋼,球狀
樣品管規(guī)格: 50ml
14號裂解介質(zhì)
性能:主要是0.5mm釔穩(wěn)定氧化鋯珠,可用來裂解堅(jiān)硬的細(xì)胞壁。如,革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌、組織、孢子、酵母、霉菌。
適用樣品類型:所有樣本、堅(jiān)硬的組織、骨骼肌、骨骼、種子、孢子
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:球狀
樣品管規(guī)格:2ml、15ml、50ml、96孔板(1.2ml)
15號裂解介質(zhì)
性能:主要是2mm釔穩(wěn)定氧化鋯珠,可用來裂解堅(jiān)硬的細(xì)胞壁。如,堅(jiān)硬的莖、根和種子、整子昆蟲。
適用樣品類型:動植物組織、木頭、種子、非常致密的土壤和粘土、整子昆蟲、蜱、古老和脫水的組織
作用:DNA、RNA、蛋白質(zhì)和其它小分子提取
介質(zhì)形狀:球狀
樣品管規(guī)格:2ml、15ml、50ml、96孔板(1.2ml)
- 上一篇:
- 下一篇:測博-高速組織勻漿機(jī)的適用范圍及基本注意事項(xiàng)